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成年小鼠關節軟骨細胞原代培養
C57小鼠,8-10周,通過頸椎脫位處死,浸入75%乙醇浸泡5分鐘,轉移到通風柜中的解剖盤中。
使用眼科剪和鑷子,使髖關節脫臼,保持股骨頭完整。
用止血qian去除每個股骨頭的軟骨帽,將組織放入含2%雙抗的PBS中。
用冰冷的含2%雙抗的PBS清洗2-3遍,將關節軟骨小心移到2ml離心管中。
用眼科剪dao將軟骨帽剪成約1mm3的碎片,加入3ml預熱的Collagenase D(1.5mg/ml)。
放入37℃、80rpm的搖床中進行第一次消化,時間2h 。
第一次消化結束后,加入含血清的培養基終止消化,40um的細胞篩過濾后,離心1500rpm,2min。
沉淀用DMEM完quan培養基重懸,計數,種植在24孔板中。
在未消化的組織中加入3ml預熱的Collagenase D,放入37℃、80rpm的搖床中進行第二次消化,時間2h,然后收集細胞。
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